Амидаза (AMD)
Ферменттер:Макромолекулалық биологиялық катализаторлар, ферменттердің көпшілігі ақуыздар
Амидаза:Ацил тобын суға ауыстырып, бос қышқылдар мен аммиак түзу арқылы әртүрлі эндогендік және бөгде алифатты және ароматты амидтердің гидролизін катализдейді. Гидроксам қышқылдары және басқа да органикалық қышқылдар өсу факторларының, антибиотиктердің және ісік ингибиторларының құрамдас бөліктері болғандықтан, дәрілік заттар ретінде кеңінен қолданылады. Амидазаларды катализатордың стереоселективтілігіне сәйкес R типті және S типті ацилазаларға бөлуге болады.
Амидтердің гидролизін катализдеумен қатар, амидаза гидроксиламин сияқты бірлескен субстраттар қатысуымен ацил тасымалдау реакцияларын да катализдей алады.
Әртүрлі көздерден алынған амидазалардың субстратқа тәндігі әртүрлі, олардың кейбіреулері тек ароматты амидтерді гидролиздей алады, кейбіреулері тек алифатты амидтерді гидролиздей алады, ал кейбіреулері α-немесе ω-аминоамидтерді гидролиздейді. Аминдердің көпшілігі тек ациклді немесе қарапайым ароматты амидтер үшін жақсы каталитикалық белсенділікке ие, бірақ күрделі ароматты амидтер үшін гетероциклді амидтердің, әсіресе ортоорынбасарлары бар амидтердің, белсенділігі әдетте төмен (тек бірнеше ферменттер жақсы каталитикалық әсер көрсетеді).
Каталитикалық механизм:
| Ферменттер | Өнім коды | Өнім коды |
| Фермент ұнтағы | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | 19 амидаза жиынтығы, әрқайсысы 50 мг, 19 зат * 50 мг / зат немесе басқа мөлшерде |
| Скрининг жинағы (SynKit) | ES-AMD-1900 | 19 амидаза жиынтығы, әрқайсысы 1 мг 19 зат * 1 мг / зат |
★ Субстраттың жоғары ерекшелігі.
★ Хиральды селективтіліктің күштілігі.
★ Жоғары түрлендіру тиімділігі.
★ Қосалқы өнімдерді азайту.
★ Жеңіл реакция жағдайлары.
★ Қоршаған ортаға зиянсыз.
➢ Субстраттың ерекшелігіне байланысты белгілі бір субстраттар үшін ферменттік скрининг жүргізілуі керек және мақсатты субстратты ең жақсы каталитикалық әсермен катализдейтін ферментті алу керек.
➢ Жоғары температура, жоғары/төмен рН және жоғары концентрациялы органикалық еріткіш сияқты экстремалды жағдайлармен ешқашан жанаспаңыз.
➢ Әдетте, реакция жүйесіне субстрат, буфер ерітіндісі (ферменттің оңтайлы реакция рН мәні) кіруі керек. Ацил тасымалдау реакция жүйесінде гидроксиламин сияқты қосалқы субстраттар болуы керек.
➢ AMD оңтайлы рН және температурадағы реакция жүйесіне соңғы болып қосылуы керек.
➢ Барлық AMD түрлерінің оңтайлы реакция жағдайлары әртүрлі, сондықтан олардың әрқайсысын жеке-жеке зерттеу қажет.
1-мысал(1):
Әртүрлі амид субстраттарына гидролиз белсенділігі
| Субстрат | Нақты әрекет мкмоль мин-1mg-1 | Субстрат | Нақты әрекет мкмоль мин-1mg-1 |
| Ацетамид | 3.8 | ο-OH бензамид | 1.4 |
| Пропионамид | 3.9 | p-OH бензамид | 1.2 |
| Лактамид | 12.8 | ο-NH2бензамид | 1.0 |
| Бутирамид | 11.9 | p-NH2бензамид | 0,8 |
| Изобутирамид | 26.2 | ο-Толуамид | 0,3 |
| Пентанамид | 22.0 | p-Толуамид | 8.1 |
| Гексанамид | 6.4 | Никотинамид | 1.7 |
| Циклогексанамид | 19.5 | Изоникотинамид | 1.8 |
| Акриламид | 10.2 | Пиколинамид | 2.1 |
| Метакриламид | 3.5 | 3-Фенилпропионамид | 7.6 |
| Пролинамид | 3.4 | Индол-3-ацетамид | 1.9 |
| Бензамид | 6.8 |
Реакция рН 7,5 болатын 50 мМ натрий фосфаты буферлік ерітіндісінде 70°C температурада жүргізілді.
| Амидтер | Гидроксиламин | Гидразин |
| Ацетамид | 8.4 | 1.4 |
| Пропионамид | 18.4 | 3.0 |
| Изобутирамид | 25.0 | 22.7 |
| Бензамид | 9.2 | 6.1 |
Реакция рН 7,5 болатын 50 мМ натрий фосфаты буферлік ерітіндісінде 70°C температурада жүргізілді.
Байланысты реагент концентрациясы: амидтер, 100 мМ (бензамид, 10 мМ); гидроксиламин және гидразин, 400 мМ; фермент 0,9 мкМ.
2-мысал(2):
3-мысал(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al. Экстремофильдер, 2001, 5:183-192.
2. Гуо ФМ, Ву Дж.П., Ян Л.Р. және т.б. Process Biochemistry, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Чжэн Р.К., Джин Дж.К., Ву З.М. және т.б. Биоорганикалық химия, 2017, Интернетте қолжетімді 7.
